一、 操作室厌氧环境形成

1.按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室内放入二个无毒塑料袋。

2.通电源开照明灯，开控温仪，调节所需温度及安全温度。

3.操作室内放入1000g钯粒（封闭）和500g干燥剂,并放入美兰指示剂（封闭）。

4.关紧取样室内外门，并抽真空校验。

5.操作室内**次置换（氮气置换）：

（1）先用橡皮管插入操作室内进气口，另一头插入塑料袋。

（2）接通氮气进气路，打开氮气控制阀，使二只塑料袋充足氮气，然后扎紧袋口。

（3）把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧。

（4）把塑料袋内氮气渐渐地放于操作室内，**全部放出。

6.操作室第二次置换（氮气置换）重复一 次充氮过程，并注意随时用脚踏开关开闭排气。

7.操作室第三次置换（混合气体置换）：

（混合气体配比为：N2:H2:CO2=85%:10%:5%）

（1）调换气路打开混合气道通阀门进气，充气时要随时脚踏开关开闭排气。

（2）混合气充满塑料袋后，关掉混合气直通阀（三通阀），使混合气经过流量计输入操作并调整流量计，流量为每分钟10毫升左右。

（3）把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内。

（4）通过三次换气后，操作室内气体含氧量已处于极微量状态。

8.操作室内打开钯粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一 小时后打开美兰指示剂（美兰安瓶）观察其变色情况，不变色为操作室内达到厌氧环境。

9.开紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理。灭菌时间自定。

二、 菌种的置入和培养

1.检查取样室内门并关紧。

2.打开取样室外门，将菌种放入取样室后即关上外门。

3.取样室充氮置换三次过程：先抽真空度500毫米汞柱（66Kpa）以上停,然后人工打开氮气阀门进气,使指针回复零位后进行下次操作。

4.如选定真空度较低就需要增加置换的次数。

5.取样室内外门开启，关紧要抽低真空度100毫米汞柱（13Kpa）检验及帮助操作。

6.厌氧培养箱需要长期连续使用的条件：

（1）每天在操作室内打开美兰指示剂观察，正常情况下使用。如不正常就必须重新换气。

（2）要长期连续输入微量的混合气体，使补进的氢气能和微量的氧结合通过催化吸收，保证了室内厌氧状态，补入混合气流量选定为每分钟10毫升左右。

（3）连续培养运行一 天，更换一 次除氧剂和干燥剂。

7.接种棒灭菌器的应用：

（1）随时用镍铬电热丝使电极短路而变赤热以进行杀菌（接种棒）

（2）熔蜡处可直接放上，试管封蜡口旋转熔蜡。

8.操作室里的培养箱内的温度可任意选择和控制。

9.混合气瓶、氮气瓶输出压力调整：调节减压阀，使输出压力为0.1Mpa左右。