一、临床细菌室开展厌氧细菌培养的必要性。 

  1．厌氧菌感染的广泛性：厌氧菌是一大群在无氧环境下生长的细菌。厌氧细菌学是研究微观生态平衡、失调和调整的重要部分，在消化道菌群中，99.9%以上为厌氧菌，组成了重要的膜菌群，在生物拮抗、营养、免疫等方面具有不可估量的生理意义。 

近10年来，无芽胞厌氧杆菌及球菌是细菌性感染的重要原因之一，当深部脓肿、败血症等常规细菌学检查阴性时，往往源于厌氧菌感染。厌氧菌感染是一种内源性感染，病种遍及临床各科，人体的各个部位，各种器官均可发生厌氧菌感染。据广献报道。在菌血症中有10%可检出厌氧菌，在牙源性口面部感染病例中有94%，在吸入性肺炎及肺脓肿时有93%，在妇产科各种感染性疾病中有100%，直肠周围脓肿有77%可检出厌氧菌，而且有相当一部分病例是单一的厌氧菌感染。 

  2．厌氧菌感染在诊断和治疗上的特殊性：检出厌氧菌须具备必要的条件，如有特殊的厌氧培养系列，包括特殊采样方式、培养基、鉴定试剂及设备等。一旦确诊厌氧菌感染，在治疗也有其特殊性。 

  临床常用的氨基糖苷类抗生素，磺胺类药物对厌氧菌无效。脆弱类杆菌由于产生β内酰胺酶可对青霉素、头孢菌类β内酰胺抗生素耐药。为了有效控制临床感染性疾病，shou先必须明确感染源，是需氧菌还是厌氧菌，因此临床细菌室有必要把厌氧菌培养作为常规细菌检验。 

二、临床细菌室开展厌氧菌培养现状 

  1． 根据我室1997-2001年调查结果表明：我G100家临床细菌室开展厌氧 菌培养的情况：从未开展厌氧菌培养的占77%，未作为常规项目的占10%，不规范开展的占8%，能作为常规项目，并规范开展的仅占5%。 

  2． 我G厌氧菌培养设备病状：约95%以上的细菌室没有厌氧手套箱，在能开展厌氧菌培养的实验室中约98%实验室用厌氧缺罐作为厌氧检测设备。极个别的实验室具备用气相色谱仪鉴定菌种。有90%实验室无鉴定厌氧菌的设备。几乎所有临床细菌室均不开展厌氧菌药敏试验。 

  3． 采样方式：采样应规范、正确。但有些实验室用新鲜羊血琼脂代替厌氧培养基；用注射器作为厌氧菌输送厌氧培养标本的工具。这种操作模式，从标本离开人体到厌氧环境可能会使70%-80%的厌氧菌已不能存活。建议应尽量采纳床边采样方式，或用厌氧输送培养基，解决标本不能立即送检的问题。有自动血培养分析仪的实验室，应充分利用设备中厌氧血培养瓶检测血液、浓液等无菌体液中的厌氧菌，但应注意勿将注射器中的气体注入瓶内。 

三、临床细菌室开展厌氧培养的可行性 

  1． 临床医生已认识到厌氧菌在感染性疾病的重要性，能认真采样和送检，并能识别厌氧菌感染的重要特征，如感染局部产生气体，分泌物有恶臭、带血或呈黑色，感染部位在肛门、口腔、鼻窦、咽颊等粘膜周围；有菌血症表现，但细菌培养阴性，长期使用氨基糖甙类抗生素无效者。 

  2． 临床医生一般希望通过细菌检验报告尽快证实有无厌氧菌感染，而不是某一种菌，因此，每个实验室应加强厌氧菌的分离，再根据条件建立简易鉴定流程或复杂流程；或以涂片方式报告，如革兰阳性厌氧球菌、厌氧杆菌；革兰阴性厌氧杆菌、厌氧球菌。有条件的实验室可在耐氧试验阳性的菌株中进一步鉴定，以确定菌种类型。 

  3． 厌氧菌培养分离、鉴定，试剂的商品化，减轻了实验室准备试剂的负担。如价廉、简易的厌氧培养系统，厌氧盒为600-1000元/个；可靠的厌氧鉴定系统如API、VITEK及其他细菌鉴定系统均具有厌氧菌鉴定功能。自动化血培养分析系统均有厌氧血培养瓶，便于血、胸腹水等无菌体液的厌氧菌培养。 

  4． 美G临床实验室标准化委员会已推荐出可作为厌氧菌药敏试验的方法，如浓度梯度（Etest）法、琼脂稀释法等。当用常规厌氧菌药物治疗无效时，可做药敏试验，用于纠正原有方案。 

四、临床细菌室要不断完善，以适应临床需要 

  1． 临床细菌室工作人员要提高对厌氧细菌的检测技术，要熟悉常见厌氧菌的分类学及进展。要了解厌氧细菌在人体各部位的正常菌群和常见的厌氧致病菌。要学习厌氧培养的新技术，指导临床正确采样和输送标本。 

  2． 厌氧培养的基本条件：（1）标本采集及运送：任何标本采用床边连接种均是可取的，不能及时送检的标本，必须立即种入输送培养基，在允许时间内送检。胸腔、膀胱穿刺液，深部脓肿分泌物。女性殖器后穹隆穿刺物、坏死组织，均可作为厌氧标本。但咳出的痰、支气管分泌物、咽拭子及尿液，均不能作为厌氧菌培养标本。粪便标本只能用于难辨梭菌培养。（2）厌氧菌培养**的基础培养基：斯氏琼脂加5%羊血，适用于所有厌氧菌生长。斯氏血琼脂加万古霉素可用于革兰阴性厌氧细菌的分离。 

  在进行有目标性厌氧菌培养时，实验室可配制几种选择性培养基。如阿米卡星、万古霉素溶血平板，适用于类杆菌属的分离。阿米卡星胆盐七叶苷培养基，适用于脆弱类杆菌的分离。难辨梭菌分离培养基用于难辨梭菌的分离。（3）厌氧菌的鉴定，根据实验室的条件不同，分别建立1、2、3级的鉴定。1级鉴定可根据耐氧试验结果、革兰染色反应、菌落特点，提供厌氧菌初步推断报告。2级鉴定根据革兰染色、镜下形态、菌落特点及传统生化反应初步鉴定到种。3级鉴定采用G际公认的标准化鉴定系统，如API 20 A、MICRO-OID、VITEK-ANI、气液色谱仪等设备鉴定。（4）厌氧菌药敏试验：厌氧菌感染以经验用药为主，因为厌氧菌对现已上市的药物的敏感性有非常合理的预测性。厌氧菌的药敏试验耗时太长（4-6d），因此一般情况下不需要作药敏试验。当经验用药无效，或评价一种新的抗厌氧菌药物，或耐药监测时也需要做药敏试验。当大批量样品检测时，采用琼脂稀释法**为理想，但当个别菌株需做药敏试验时，用Etest法或ATB的ANA试条的方法较为方便。（5）厌氧菌的菌种保存：一般在以下3种情况下需要保存菌株，如疑难菌株的回顾性鉴定，需要用菌株制备生物制品或用于科研的菌株需要长期保存。不同类别厌氧菌保存方法不同，如革兰阳性芽孢杆菌可用蒸馏水低温保存。革兰阳性厌氧球菌或杆菌采用血液低温保存较好。-40℃以下较为合适，因为在低温时新陈代谢处于抑制状态，不繁殖、不死亡，并且血液在低温下可形成低氧化还原电势。冷冻干燥保存菌株适用于所有厌氧菌。 五、厌氧细菌学研究进展及展望 #p#分页标题#e#

  1．厌氧菌检测方法学进展，用胞外酶原理设计的鉴定系统，不需要在厌氧环境中培养。厌氧气体发生剂的改进，不需要在发生袋中加水，不需要触酶，大大简化了操作步骤。全自动细菌鉴定系统的问世，为厌氧菌鉴定创造了更为便利和快捷的条件。 

  2．分子生物学技术介入厌氧细菌学的研究和检测，大大缩短了报告时间。对厌氧菌的鉴定由一般表型特征的鉴定深化为遗传性特征的鉴定。目前聚合酶链反应技术已应用到临床，直接从标本中检测厌氧致病菌，应用扩增16S核蛋白DNA限制性分析法鉴定放线菌。   在研究厌氧菌的耐药机理方面，已发现革兰阴性厌氧菌如脆弱类杆菌、卟啉单胞菌的孔状分子结构与其耐药性有关，并在真核细菌和弯曲菌属中有结构类似的孔状分子结构，位于细菌外膜，并了解到这种结构与细菌膜渗透性下降导致耐药有关。 

  展望：虽然实验科学的快速发展推动了厌氧细菌的研究，但与临床需要相比还有很大差距，如厌氧菌分离需要时间过长（48-72h）、费用高、开展不普及。今后的任务shou先要从普及入手，分子生物学方法要着眼于临床需要，建立正确便捷的检测方法，使每一个细菌室都能开展厌氧菌培养。此外，在基础理论方面，要深入研究厌氧菌感染的病因、致病因素和免疫机理，从而有效地预防和治疗厌氧菌感染。